光源的光谱分布会很大程度地影响南红玛瑙的颜色，尤其是影响南红玛瑙的目视颜色评定。南红玛瑙的目视颜色评定一般都是用南红玛瑙的颜色与孟塞尔色卡的颜色作比较，即使两者的颜色相同，两者的光谱反射曲线也不尽相同，南红玛瑙的目视颜色评定属于异谱同色的颜色比较。如果光源的光谱分布不同，异谱同色的颜色比较可能产生很大的差异。因为不同的致色原因可以产生相同或相似的南红玛瑙颜色，即使是用南红玛瑙的颜色与标准南红玛瑙的颜色比较也可能会出现异谱同色的颜色比较。
根据标准规定和推荐，南红玛瑙颜色评定的光源应该是符合制订的标准D65日光模拟光源。D65日光模拟光源的色温为6500K。D65日光模拟光源的质量是有CIE制订的异谱同色指数来评定的。CIE和其他相关国际标准规定用颜色和匹配的D65日光模拟光源的可见光波段的异谱同色指数应该是B或更好。因此在南红玛瑙的颜色评定中应避免紫外荧光的影响，用于南红玛瑙颜色评定的D65日光模拟光源的紫外光谱功率分布应越小越小。
标准光源箱则是一种能够为用户提供D65日光模拟光源环境的照明灯箱设备，并且可以统一南红玛瑙颜色评定环境和背景。当使用标准光源箱对南红玛瑙进行评定时，只需要满足照明和观察条件为0°照明45°观察（0/45）几何条件，就可以参考孟塞尔颜色系统对其颜色进行评价，从而依据颜色进行分类。
由于南红玛瑙的台面有许多刻面，在标准照明和观察条件下评定颜色时，刻面的表面反射以及内反射的闪烁都可以直接射入眼睛，造成观察颜色的困难。在南红玛瑙颜色评定过程中允许稍微改变南红玛瑙台面的角度，以避免直射反射光的影响。一般情况下，南红玛瑙台面角度的改变应小于10°。稍微改变观察角度也可以减少或避免表面明反射和内反射光对颜色评定的影响。
